福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度
一、原理
蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸,在碱性条件下,可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色(生成钼蓝和钨蓝化合物)。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比,可用比色法测定。
二、实验仪器
分光光度计,试管,移液管,容量瓶,分析天平,烧杯
三、实验试剂
1.Folin-酚试剂甲:碱性铜溶液
甲液:取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中
乙液:取CuSO4.5H2O晶体0.5g,溶于1%酒石酸钾100ml。临用时按甲:乙=50:1混合使用。
2.Folin-酚试剂乙:将10g钨酸钠、2.5g钼酸钠、70ml蒸馏水、5ml85%磷酸继10ml浓盐酸置于150ml的磨口圆底烧瓶中,充分混匀后,接上磨口冷凝管,回馏1小时,再加入硫酸锂15g,蒸馏水5ml及液溴数滴,开口煮沸15分钟,在通风橱内驱除过量的溴。冷却,稀释至100ml,过滤,滤液成微绿色,贮于棕色瓶中。临用时,用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定,用酚酞作指示剂,根据滴定结果,将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
标准蛋白质溶液:称取1g牛(人)血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中,并稀释至1000ml